ANTICUERPOS MONOCLONALES

ANTICUERPOS MONOCLONALES

QUE SON?

ANTICUERPOS Derivados de un solo clon de linfocitos( cuando hablamos de un solo clon, hablamos de que el linfocitos va a producir un solo tipo de anticuerpos)

Son anticuerpos altamente específicos. osea solo para un determinado anticuerpo.Son elaboradas en el laboratorio.Digamos que el linfocito solo produce un solo tipo de anticuerpos.

nota!!!: muchos piensan que los anticuerpos que sintetizan nuestro cuerpo son específicos pero no es cierto. los cada anticuerpo que producen nuestros linfocitos identifican desde 2 diferentes tipos de antígenos, por lo tanto no son tan específicos, a estos se les llama anticuerpos POLICLONALES.

                         PERO??... COMO LAS OBTENGO????

FUNDAMENTO

La idea es fusionar  dos células, un linfocito que aya codificado solo un anticuerpo y una célula inmortal (mieloma) . mas adelante aclararemos porque es inmortal.

ANTES DEBE SABER QUE:...

Obtener anticuerpos monoclonales y en gran cantidad ha sido un objetivo de los inmunólogos. 

El primer paso en este sentido se produjo a raíz del descubrimiento de la existencia de tumores de linfocitos B, al comprobar que cuando se produce la transformación tumoral en un linfocito B maduro, aparece un tumor de células plasmáticas, al que se denomina mieloma. 

Este tipo de tumor induce la producción de una inmunoglobulina homogénea para la que no es fácil determinar su especificidad, ya que el fenómeno de transformación tumoral es altamente aleatorio. 

Pero estas células tumorales presentan la ventaja de que son inmortales (carecen del fenómeno de la apoptosis), por lo que se pueden cultivar in vitro indefinidamente.Al mismo tiempo, ha sido imposible hasta ahora el aislamiento y crecimiento de clones individuales de linfocitos B, ya que estas células,extraídas de su entorno natural no se pueden cultivar indefinidamente. 

Fue en 1975 cuando los investigadores Georges Kölher y Cesar Milstein describieron una técnica que permitía combinar ambos aspectos y que concluía en la producción de lo que denominaron hibridomas. 

Esta técnica consistía en la fusión de dos células, una programada para producir un anticuerpo específico (célula plasmática) y otra inmortal con gran capacidad de crecimiento pero que no secretase inmunoglobulina (célula de mieloma). ACA LES DEJO EL LINK DEL SITIO QUE SAQUE ESTA INFORMACIÓN .http://www.kinastchile.cl/ccc35.htm

Veamos el modelo clásico: 

PASOS:

 1ero: A una rata o animal de experimentación , inocularle una bacteria, esta bacteria que es una antígeno tiene en su superficie determinados unidades antigènicas que se ven de colores en la imagen.

2do: La rata va a comenzar a producir linfocitos(pelotas de color verde), para que combata a esa bacteria y cada linfocito producirá un anticuerpo para cada determinanate antigénica (los anticuerpos se observan del mismo color que las determinantes antigénicas). Finalmente en nuestro suero encontraremos una mezcla de anticuerpos, pero la idea es que los linfocitos produzcan solo un tipo determinado de anticuerpos que puede ser cualquiera entonces pasamos al siguiente paso.

3ero:Se extrae los linfocitos y se funciona con las células "inmortales"(mieloma), esta fusión produce un hibrido llamado hibridoma, esta hibridoma tiene la capacidad de sintetizar solo un determinado tipo de anticuerpo, si se funciona con el linfocito que produce una anticuerpo de color azul , rojo, morado o amarillo como se esquematiza en la figura.  y así se obtiene los anticuerpos monoclonales.

Esto es de conocimiento basico, ya que  esta dirigido a estudiantes.pero aquí les dejo un link donde expliaca todo esta muy bueno. http://www.kinastchile.cl/ccc35.htm

PERO ??... CUAL ES SON SUS APLICACIONES???

Como es altamente especifico, se utiliza en las ramas de la ciencia como señalador.

Identifica un determinado gen , que tal vez se desea clonar o marcar como también la identificación de proteínas o activación de enzimas gracias a la especificidad de estas anticuerpos.

Contrarrestar las enfermedades originadas ya sean por bacterias ,virus, u otras patologías.

Para la elaboración de técnicas que permitan identificar enfermedades como ELISA.

ESTUDIEN MUCHO!!!!

TECNICA PCR

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

(PCR)

El PCR es una tecnica que de manera artificial duplica  "n" veces una fragmento o una cadena de ADN

Veamos algo de su Historia:

Hasta 1980 .Antes de que se diseñara esta técnica si era posible duplicar  fragmentos de ADN, esto era posible por la incorporación en bacterias del fragmento que se deseaba duplicar, y aprovechando su capacidad de división obtenia varias copias.Lo malo es que era muy tedioso y demandaba mucho tiempo y muy costoso

El invento del RCP surgió en el año 1983, por el Bioquímico Kary Mullis mientras trabajaba en los laboratorios CETUR Corporation y en 1993 Kary Mullis se lleva el Premio novel de Química por su aporte Pero su técnica tenia un problema, y demandaba la utilización de varias polimerasas.(Mas adelante les mostrare cual es fue su Dolor de Cabeza).

CURIOSIDAD!!: La gran idea surgió de improviso sin pensarlo cuando  Kary Mullis  conducía su auto! 

La Tecnica se basa en la Manipulación de la temperatura, tres manipulaciones para ser exactos.

la primera es de 96ºC , la segunda de 54 ºC y la tercera de 75ºC. y se calsifican en tres etapas:

1.- Desnaturalización.

2.- Hibridación o recocido.

3.- Elongación.

¿En que consiste la prueba?.

Consiste en Duplicar un Fragmento de ADN, pero Manipulando la Temperatura!!! 

Pero la técnica se FUNDAMENTA en la función natural de las Polimerasas en duplicar ADN.

para la elaboración de esta técnica se necesitamos lo siguiente: 

Para un ciclo de replicación se necesita lo siguiente:

1)8 Desoxirribonucleiosidos-Trifosfato (dNTP: dATP, dCTP,dGTP,dTTP) = QUE ES ESTO?¿

Son los sustratos que el Taq polimerasa va utilizar para que apartir de ellos formar la nueva molécula de ADN, nota!!! El dATP te dará adenina, el dCTP dará citocina y así los otros.

2) 2 Cebadores: Los cebadores son fragmentos de ADN de solo 20 pares de bases nitrogenadas (oligonucleotidos) estos señalan el sitio donde debe actuar el Tap polimerasa para comenzar la replicación.

son altamente específicos y por ellos se logra la duplicación del fragmento deseado. Se utilizan 2 porque  vana señalar amas cadenas  primitivas osea va a acoplarce cada una a las 2 cadenas  originales.

3) Iones Divalentes y monovalentes : Los iones como el Mg++ , Cl ++ , Mn++  actúan como cofactores!!! quiere decir que  permite que la enzima Tap polimerasa se active y actúe. así también como el ion monovalente K+

4)Solución Buffer: Esta solución mantiene el Ph adecuando para que el ADN polimerasa (Taq polimerasa) tenga 100% de eficiencia. La solución contiene KC, Cl, (dando un ph de 8.3a temperatura ambiente) y MgCl2, estos elementos sostendrán el Ph adecuado.

5) Taq Polimerasa ??( que es esto, porque Taq): Como bien sabemos a 96 ºC toda clase de proteínas en nuestro cuerpo y de la mayoría de los seres vivos se desnaturalizan, es por esto que se tuvo que utilizar  ADN polimerasa de otros organismos vivos que puedan soportar estas temperaturas, y entre ellas estubo una bacteria llamada Thermococcus litoralis, que soporta  elevadas temperaturas hasta de 75ºC y aguanta 45 minutos a 95 ºC, es por eso que se extrajo su ADN polimerasa y se le dio el nombre de Taq polimerasa, asiendo alucion a su nombre, eso es todo el rollo del Taq polimerasa.

NOTA!!!!

Hay que recordar de que en la replicación natural suelen aparecer errores y claro se corrigen. En la replicación artificial (PCR) también suelen cometerse errores que deben corregirse de algún modo, es por eso que junto con las Taq polimerasa están los Vent y Pfu ( que son enzimas de corrección de 2 bacterias = de resistentes a altas temperaturas llamadas Pyrococcus Friosus (Pfu) y Thermococcus Litoralis (Vent). 

6) ADN molde: que es tu muestra que contiene la región molde que se quiere amplificar.

7) Termociclador: Es el aparato que se encarga de hacer los cambios de temperatura necesarios para la replicación.

• 
  

CONTINUARAAA...............