ANTICUERPOS MONOCLONALES

ANTICUERPOS MONOCLONALES

QUE SON?

ANTICUERPOS Derivados de un solo clon de linfocitos( cuando hablamos de un solo clon, hablamos de que el linfocitos va a producir un solo tipo de anticuerpos)

Son anticuerpos altamente específicos. osea solo para un determinado anticuerpo.Son elaboradas en el laboratorio.Digamos que el linfocito solo produce un solo tipo de anticuerpos.

nota!!!: muchos piensan que los anticuerpos que sintetizan nuestro cuerpo son específicos pero no es cierto. los cada anticuerpo que producen nuestros linfocitos identifican desde 2 diferentes tipos de antígenos, por lo tanto no son tan específicos, a estos se les llama anticuerpos POLICLONALES.

                         PERO??... COMO LAS OBTENGO????

FUNDAMENTO

La idea es fusionar  dos células, un linfocito que aya codificado solo un anticuerpo y una célula inmortal (mieloma) . mas adelante aclararemos porque es inmortal.

ANTES DEBE SABER QUE:...

Obtener anticuerpos monoclonales y en gran cantidad ha sido un objetivo de los inmunólogos. 

El primer paso en este sentido se produjo a raíz del descubrimiento de la existencia de tumores de linfocitos B, al comprobar que cuando se produce la transformación tumoral en un linfocito B maduro, aparece un tumor de células plasmáticas, al que se denomina mieloma. 

Este tipo de tumor induce la producción de una inmunoglobulina homogénea para la que no es fácil determinar su especificidad, ya que el fenómeno de transformación tumoral es altamente aleatorio. 

Pero estas células tumorales presentan la ventaja de que son inmortales (carecen del fenómeno de la apoptosis), por lo que se pueden cultivar in vitro indefinidamente.Al mismo tiempo, ha sido imposible hasta ahora el aislamiento y crecimiento de clones individuales de linfocitos B, ya que estas células,extraídas de su entorno natural no se pueden cultivar indefinidamente. 

Fue en 1975 cuando los investigadores Georges Kölher y Cesar Milstein describieron una técnica que permitía combinar ambos aspectos y que concluía en la producción de lo que denominaron hibridomas. 

Esta técnica consistía en la fusión de dos células, una programada para producir un anticuerpo específico (célula plasmática) y otra inmortal con gran capacidad de crecimiento pero que no secretase inmunoglobulina (célula de mieloma). ACA LES DEJO EL LINK DEL SITIO QUE SAQUE ESTA INFORMACIÓN .http://www.kinastchile.cl/ccc35.htm

Veamos el modelo clásico: 

PASOS:

 1ero: A una rata o animal de experimentación , inocularle una bacteria, esta bacteria que es una antígeno tiene en su superficie determinados unidades antigènicas que se ven de colores en la imagen.

2do: La rata va a comenzar a producir linfocitos(pelotas de color verde), para que combata a esa bacteria y cada linfocito producirá un anticuerpo para cada determinanate antigénica (los anticuerpos se observan del mismo color que las determinantes antigénicas). Finalmente en nuestro suero encontraremos una mezcla de anticuerpos, pero la idea es que los linfocitos produzcan solo un tipo determinado de anticuerpos que puede ser cualquiera entonces pasamos al siguiente paso.

3ero:Se extrae los linfocitos y se funciona con las células "inmortales"(mieloma), esta fusión produce un hibrido llamado hibridoma, esta hibridoma tiene la capacidad de sintetizar solo un determinado tipo de anticuerpo, si se funciona con el linfocito que produce una anticuerpo de color azul , rojo, morado o amarillo como se esquematiza en la figura.  y así se obtiene los anticuerpos monoclonales.

Esto es de conocimiento basico, ya que  esta dirigido a estudiantes.pero aquí les dejo un link donde expliaca todo esta muy bueno. http://www.kinastchile.cl/ccc35.htm

PERO ??... CUAL ES SON SUS APLICACIONES???

Como es altamente especifico, se utiliza en las ramas de la ciencia como señalador.

Identifica un determinado gen , que tal vez se desea clonar o marcar como también la identificación de proteínas o activación de enzimas gracias a la especificidad de estas anticuerpos.

Contrarrestar las enfermedades originadas ya sean por bacterias ,virus, u otras patologías.

Para la elaboración de técnicas que permitan identificar enfermedades como ELISA.

ESTUDIEN MUCHO!!!!

TECNICA PCR

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

(PCR)

El PCR es una tecnica que de manera artificial duplica  "n" veces una fragmento o una cadena de ADN

Veamos algo de su Historia:

Hasta 1980 .Antes de que se diseñara esta técnica si era posible duplicar  fragmentos de ADN, esto era posible por la incorporación en bacterias del fragmento que se deseaba duplicar, y aprovechando su capacidad de división obtenia varias copias.Lo malo es que era muy tedioso y demandaba mucho tiempo y muy costoso

El invento del RCP surgió en el año 1983, por el Bioquímico Kary Mullis mientras trabajaba en los laboratorios CETUR Corporation y en 1993 Kary Mullis se lleva el Premio novel de Química por su aporte Pero su técnica tenia un problema, y demandaba la utilización de varias polimerasas.(Mas adelante les mostrare cual es fue su Dolor de Cabeza).

CURIOSIDAD!!: La gran idea surgió de improviso sin pensarlo cuando  Kary Mullis  conducía su auto! 

La Tecnica se basa en la Manipulación de la temperatura, tres manipulaciones para ser exactos.

la primera es de 96ºC , la segunda de 54 ºC y la tercera de 75ºC. y se calsifican en tres etapas:

1.- Desnaturalización.

2.- Hibridación o recocido.

3.- Elongación.

¿En que consiste la prueba?.

Consiste en Duplicar un Fragmento de ADN, pero Manipulando la Temperatura!!! 

Pero la técnica se FUNDAMENTA en la función natural de las Polimerasas en duplicar ADN.

para la elaboración de esta técnica se necesitamos lo siguiente: 

Para un ciclo de replicación se necesita lo siguiente:

1)8 Desoxirribonucleiosidos-Trifosfato (dNTP: dATP, dCTP,dGTP,dTTP) = QUE ES ESTO?¿

Son los sustratos que el Taq polimerasa va utilizar para que apartir de ellos formar la nueva molécula de ADN, nota!!! El dATP te dará adenina, el dCTP dará citocina y así los otros.

2) 2 Cebadores: Los cebadores son fragmentos de ADN de solo 20 pares de bases nitrogenadas (oligonucleotidos) estos señalan el sitio donde debe actuar el Tap polimerasa para comenzar la replicación.

son altamente específicos y por ellos se logra la duplicación del fragmento deseado. Se utilizan 2 porque  vana señalar amas cadenas  primitivas osea va a acoplarce cada una a las 2 cadenas  originales.

3) Iones Divalentes y monovalentes : Los iones como el Mg++ , Cl ++ , Mn++  actúan como cofactores!!! quiere decir que  permite que la enzima Tap polimerasa se active y actúe. así también como el ion monovalente K+

4)Solución Buffer: Esta solución mantiene el Ph adecuando para que el ADN polimerasa (Taq polimerasa) tenga 100% de eficiencia. La solución contiene KC, Cl, (dando un ph de 8.3a temperatura ambiente) y MgCl2, estos elementos sostendrán el Ph adecuado.

5) Taq Polimerasa ??( que es esto, porque Taq): Como bien sabemos a 96 ºC toda clase de proteínas en nuestro cuerpo y de la mayoría de los seres vivos se desnaturalizan, es por esto que se tuvo que utilizar  ADN polimerasa de otros organismos vivos que puedan soportar estas temperaturas, y entre ellas estubo una bacteria llamada Thermococcus litoralis, que soporta  elevadas temperaturas hasta de 75ºC y aguanta 45 minutos a 95 ºC, es por eso que se extrajo su ADN polimerasa y se le dio el nombre de Taq polimerasa, asiendo alucion a su nombre, eso es todo el rollo del Taq polimerasa.

NOTA!!!!

Hay que recordar de que en la replicación natural suelen aparecer errores y claro se corrigen. En la replicación artificial (PCR) también suelen cometerse errores que deben corregirse de algún modo, es por eso que junto con las Taq polimerasa están los Vent y Pfu ( que son enzimas de corrección de 2 bacterias = de resistentes a altas temperaturas llamadas Pyrococcus Friosus (Pfu) y Thermococcus Litoralis (Vent). 

6) ADN molde: que es tu muestra que contiene la región molde que se quiere amplificar.

7) Termociclador: Es el aparato que se encarga de hacer los cambios de temperatura necesarios para la replicación.

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CONTINUARAAA...............

FARMACOLOGÍA BÁSICA (INTRODUCCIÓN Y CONOCIMIENTOS BÁSICOS)S

FARMACOLOGÍA BÁSICA

Hola a todos,  para entender la farmacología , hay que tener  conceptos de química , anatomía, biología, y sobre todo fisiología.

Antes de darle un concepto, respondamos primero las siguientes preguntas.

¿Que es  una Droga?

Es cualquier sustancia natural o sintética que altera el estado fisiológico de un ser vivo. Pero hay dos tipos de drogas:

1.-Droga Medicinales o Fármacos y 2.-Droga no Medicinales

Las Drogas medicinales son utilizadas para uso terapéutico, prevención y de diagnóstico de enfermedades.

Y las Drogas no medicinales, son utilizados en la sociedad, algunas son ilegales como la cocaína,heroína, etc. Pero también están lo de uso legales como la, cafeína,nicotina y alcohol.  

Pero debemos tener presente que un fármaco no es especifico siempre, por ejemplo si nos da fiebre, nos dan una pastilla para bajarla, pero el fármaco no solo actúa bajando la fiebre, si no que tiene efectos secundarios, y son esos efectos que se desea eliminar. Aunque hay medicamentos específicos, pero son pocos.

¿Que es un medicamento? 

Un medicamento es un fármaco listo para el consumo(tiene forma), tiene la forma típica de una "pastilla"

Estando Claro estos conceptos, definamos a la Farmacología.

¿Que es la farmacología?

Es la ciencia que estudia las acciones, usos, mecanismos y efectos bueno y adversos de los fármacos.

Clasificación de los Fármacos y Nombres de los fármacos.

Los fármacos tienen un primer nombre y un segundo. El primer nombre es general, en todos los países del mundo se va llamar así, pero su nombre comercial varia. Por ejemplo  el Pentobarbital es una nombre genérico y su nombre comercial mas conocido es el Nambutal, aunque puede a ver mas.

Los fármacos se pueden clasificar dependiendo de diversos factores, estos factores pueden ser:

Sus Acciones Farmacoterapéuticas: que es lo que trata de solucionar.

Sus Acciones Farmacológicas: que es lo que hace en el cuerpo.

Sus Acciones a nivel molecular: que es lo que altera a nivel celular.

Su Naturaleza química: de que esta hecho.

Antes de abarcar mas aun el estudio de la farmacología, tenemos que entender 2 conceptos importantes y en base a ellos,se rige la farmacología, estos son:

Fármacocinética: Es el estudio de todas las reacciones que tiene el cuerpo hacia el fármaco,estudia por lo tanto la liberación, absorción, distribución metabolisación y la excreción de los fármacos

Fármacodinámica: Es el estudio de como actúa el fármaco en los órganos o individuos.estudia por lo tanto los efectos y acciones de los distintos fármacos en el cuerpo u órgano.

Pero.... ¿Como Funcionan los Fármacos?

Un fármaco produce una alteración o cambio del funcionamiento fisiológico, al interaccionar con el organismo a nivel químico. en otro blogger lo veremos mas a fondo, estos son conceptos generales que hay que saber.

La mayoría de los fármacos , se conocen que dosis se debe administrar (fármacos especifico), pero hay algunos fármacos (anestésicos generales y anti ácidos) que por poseer algunas propiedades fisioquimicas tiene un MECANISMO DE ACCIÓN INTENSIFICO,por lo que se  suele administrar mas dosis de lo normal. 

Sabemos que toda célula posee una membrana celular , esta membrana es porosa, y por estos poros salen y entran nutrientes hacia la célula , pero no solo por los poros, si no también proteínas, canales y por su puso el cambio de carga de la membrana ( potencial de membrana), y sobre ellas están los receptores celulares.

si no recuerdan sobre el potencial de membrana, aquí es dejo un link buenísimo:

http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Sinapsis_potencial_biolectrico.html

y ese otro enlace sobre la membrana celular, esta bien didactico:

http://aurorapedreros.wordpress.com/membrana-plasmatica-y-sus-funciones/

Bueno , todo fármaco tiene como objetivo principal estimular , inhibir o potenciar, enzimas u otros factores pero,lo hacen a nivel celular, tanto modificandolo interna y externamente, pera esto se vale de varias rutas, puede ser canales en la membrana o adaptada a un receptor sobre ella. También actúan a nivel de enzimas, hay 4 tipos de receptores.Los que están asociados a proteínas(porteinaG) , los receptores que están directamente  en los canales ionicos, asosciads directamente a tirosina-cinasa.

Sistema de Transporte

Algunos fármacos actúan  sobre los canales ionicos de la células,recordemos que los canales ionicos, son conductos por donde entran y sales iones (Na+,K+,etc), estos conductos son importantes para mantener la funciones de la célula, una de ellas es la de los impulsos nerviosos.Los anestésicos locales, bloquean los canales de Na+,esto no permite que halla una despolarización y por lo tanto no halla una estimulo(no hay dolor).

Moléculas Transportadoras

Las moléculas transportadoras de nutrientes son proteínas, unas utilizan energía(Bomba de Na+ y K+) y otras no.Los fármacos actúan también a este nivel, bloqueando o activando el funcionamiento de estas proteínas.

Enzimas

De más hay que resaltar, que una enzima necesita un sustrato para actuar,(complejo enzima sustrato).Los 

Fármacos actúan como falsos sustratos o bien las inhiben.

RECEPTORES

Los receptores son el mecanismo a través del cual producen sus efectos la mayoría de los fármacos. Los receptores están situados en la membrana celular tanto interna como externamente, son varios las sustancias que se fijan a ellas, entre ellas tenemos : sustancias endógenas( Enzimas ,hormonas y neurotrasmisores ) y sustancias exógenas como los fármacos.

 Nota: Todas las células tiene distintos tipos de receptores.

HASTA AQUÍ ESTE INFORMACIÓN, PRONTO ESTARÉ SUBIENDO EL RESTO, RECORDEMOS DE QUE ES EXTENSA Y UN PODO TEDIOSA COMPRENDERLA.

ROLANDO

COAGULACIÓN SANGUÍNEA

COAGULACIÓN SANGUÍNEA

Hemostasia

Definición: prevención de la perdida de la sangre

Para que se active este proceso llamado hemostasia, el estimulo desencadenante es una lesión, desgarro o rotura de un vaso:

A) MECANISMO DE LA HEMOSTASIA

1.- ESPASMO VASCULAR: la primera reacción del vaso ante una lesión es, la vasoconstricción del musculo liso del vaso

2.- FORMACIÓN DEL TAMPÓN PLAQUETARIO

3.-FORMACIÓN DEL COAGULÓ COMO RESULTADO DE LA COAGULACIÓN SANGUÍNEA

4.-PROLIFERACION FINAL DEL TEJIDO FIBROSO EN EL COAGULÓ SANGUÍNEO PARA CERRAR EL AGUJERO DEL VASO PERMANENTEMENTE 

La lesión vascular (rotura o desgarro) estimula la adherencia de las plaquetas, pero su adhesión se debe gracias al factor de Von Willebrand o factor 8.

1)                1.-  ESPASMO VASCULAR

El espasmo  vascular o contracción vascular es el  primero paso contra una rotura, esta mediado por  mecanismos que va a iniciar el primero en:

1.1-Espasmo miógeno: Es la vasoconstricción propia pero mediada por algunos factores autacoides locales, sin embargo las plaquetas por su parte en vasos pequeños liberan tromboxano A2, que es un vasoconstrictor.

1.2.-Autacoides: son elaboradas por metabolismos de unas células, los autacoides son:

1.2.1.-Histamina: es un vasodilatador, es producido por los mastocitos (basófilo circulante), células endoteliales y plaquetas.

1.2.2.-Serotonina: es un vasoconstrictor, liberado por las plaquetas que inhibe la secreción gástrica y estimula el musculo liso.

1.2.3.-Bradiquininas: Es un vasodilatador, es liberado por los mastocitos en una problema anafiláctico

*los eicosanoides también intervienen en estos mecanismos estos son (prostaglandinas, leucotrienos y los tromboxanos.

1.3.- REFLEJOS DE NERVIOS: estos se inician a partir del impulso nervioso de dolor

El espasmo  vascular dura  varios minutos e incluso horas, y es en este espasmo donde se da el taponamiento plaquetario y de la coagulación sanguínea.

              2.-FORMACIÓN DEL TAMPÓN PLAQUETARIO

Para formarse el tampón plaquetario y se adhiera a las paredes de la lesión es necesario el factor 8 ya antes nombrado, este factor 8  se fija en la superficie de las plaquetas (las plaquetas tiene en su superficie  un receptor llamado glucoproteína IB(GPIB) y también se fija al colágeno, esta adhesión activa la actividad plaquetaria exponiéndose a factores y también secretando  ciertas sustancias como la serotonina ya dicha, ADP, trombina y tromboxano.

Para comprender la formación del tampón plaquetario, debemos conocer la naturaleza de las mismas plaquetas.

2.1Características físicas y químicas de las plaquetas

Las plaquetas o también llamadas trombocitos, son discos diminutos de 1 – 4u. se origina a partir de la fragmentación de los megacariocitos en la medula ósea, son por lo tanto fragmentos de megacariocitos.

En su citoplasma hay:

Por no poseer núcleo, no pueden reproducirse, pero en su citoplasma contiene moléculas de actina y misiona, estas son proteínas contráctiles, también posee tromboastenina que es el que contrae a las plaquetas.

Posee restos del retículo endoplasmatico y aparato de Golgi, estos sintetizan y almacenan grandes cantidades de Ca++.

Posee mitocondrias y sistemas enzimáticos que forman ATP Y ADP.

Posee un sistema enzimático que sintetizan prostaglandinas.

Posee un factor de crecimiento celular, para que las células endoteliales, células de musculo liso del vaso y los fibroblastos crezcan y se multipliquen.

Recordemos que los vasos sanguíneos están formados por células endoteliales y tiene musculo liso.

En su membrana hay:

Su membrana de las plaquetas están hechas de glucoproteínas  son muy importante ya que no les permite adherirse alas paredes endoteliales, pero si están a alas paredes dañadas, y mas aun al colágeno expuesto. Poseen gran cantidad de fosfolípidos, estos fosfolípidos son importantes, porque activan múltiples fases de la coagulación.

2.2.-Mecanismo del tampón plaquetario 

Las plaquetas al entrar en contacto con la superficie o vaso dañado, cambian sus características y forma normales drásticamente, se hinchan y forman seudópodos que se adhiera al colágeno del vaso y se fijan gracias al factor  8, sus proteínas constrictoras se contraen, liberando sus gránulos, segrega grandes cantidades de ADP y sus enzimas forma tromboxano A2 , estos dos activan a las plaquetas cercanas. Luego se elabora hebras de fibrina que son los que le darán rigidez ala pared del vaso que fue dañado.

3.- FORMACION DEL COAGULO SANGUINEO

El coagulo aparece a los 15 a 20 segundos de haberse ocurrido la lesión(recordemos que en este paso sigue la vasoconstricción), el coágulo de sangre cierra ya la salida del agua y es originada por todos los factores de coagulación que veremos a continuación.

A continuación se observa, los factores de coagulación:

FACTORES DE COAGULACIÓN DE LA SANGRE Y SUS SINONIMOS
SINONIMOS	FACTORES DE COAGULACIÓN
Fibrinógeno	Factor 1
Protrombina	Factor 2
Factor tisular	Factor 3, tromboplastina tisular
Calcio	Factor 4
Proacelerina (AC-GLUBULINA)	Factor 5
SPCA	Factor 7
AHF, AHG,AHF.A	Factor 8
PTC, AHF -B	Factor 9
Factor de  Stuart anti hemofílico	Factor 10
AHF-C,PTA	Factor 11
Factor de Hageman	Factor 12
Factor estabilizador de la fibrina	Factor 13
Factor de fletcher	precalicreina
Fitzgerald,HMWK	Cinonogeno de masa molecular alta
Plaquetas

Y hasi se forma el cuagulo.

ROLANDO